治疗白癜风最专业的医院 http://pf.39.net/bjzkbdfyy/140123/4331581.html前列腺特异性膜抗原(PSMA)已在许多研究中被证实在前列腺癌细胞和其他几种癌症实体的新生血管上有特异性表达。然而，PSMA同时在肿瘤细胞和肿瘤血管上的表达仍不清楚，即使这种"双重"表达将构成一个重要的资产，以促进足够的效应细胞流入一个给定的肿瘤部位。为此，来自德国图宾根大学的科研人员在EMBOMolecularMedicine上发表了一篇文章《AnIgG-basedbispecificantibodyforimproveddualtargetinginPSMA-positivecancer》，文章中他们报告了一种PSMA抗体的产生，称为10B3，它对前列腺癌和肺鳞状细胞癌的切片具有优越的双重反应性。10B3用于构建基于Fab-和IgG-格式的T细胞招募双特异性PSMAxCD3抗体，分别指定为Fabsc和IgGsc。在体外，两种分子都表现出相当的活性。相比之下，只有较大的IgGsc分子在人源化小鼠中诱导完全和持久地消除已建立的肿瘤。用IgGsc试剂治疗3例前列腺癌患者后，观察到T细胞的明显活化和PSA水平的快速降低。理想情况下，一个最佳的靶抗原不仅在肿瘤细胞上表达，而且在肿瘤血管上表达，以允许免疫细胞充分涌入穿过受损的血管内皮和随后的肿瘤细胞破坏。此前有报道称，PSMA在前列腺癌样本的肿瘤细胞上以及许多其他实体瘤的肿瘤血管细胞上都有表达。然而，关于这种抗原的同时、双重表达的问题仍然存在。在格式方面，bsAbs通常被构建为两个共价连接的单链片段，无论是二抗体还是BiTE格式。这种分子的低血清半衰期确保了临床应用过程中良好的可控性，但需要cumber-一些连续的输注制度。这些格式的另一个缺点是许多单链片段形成聚集的倾向。作者认为，这不仅构成了工艺开发、操作的技术问题，而且可能会导致不希望的免疫原性，并增加肿瘤外T细胞活化。最近，已经开发了基于IgG的各种双特异性格式。然而，他们中的一些人保留了聚集的倾向或缺乏工业生产过程所需的稳定性。综上所述，科研人员打算使用以下方法来克服上述bsAb开发的挑战：*生成和表征一种新的PSMA抗体，以改善对肿瘤细胞以及肿瘤血管细胞的双重靶向性。*开发一种改进的bsAb格式，使用具有低聚集倾向的重组构建体，并适合于工业试验的大规模生产。*符合GMP标准的生产和快速临床应用，采用个体化的实验治疗方法，包括与抗IL-6R抗体托希利珠单抗同时用药，以防止CRS，并允许足够的剂量。实验结果10B3是一种IgG2b抗体，使用常规杂交程序获得，如材料和方法部分所述。与J(Wang等，)相比，10B3是一种成熟的PSMA抗体，据报道，它能够识别位于其顶端域的原生PSMA分子上的线性表位(图1A)，10B3不适合通过Western印迹分析检测PSMA(图EV1A)。然而，这两种抗体都能特异性地从前列腺癌细胞系中沉淀出PSMA，值得注意的是，也能从肺鳞状细胞中沉淀出PSMA。接着，在各种正常和恶性人体组织的冷冻切片上，通过免疫组化对10B3和J进行了比较。两种抗体与正常的前列腺上皮、肾脏近端小管、唾液腺和（在不同程度上）肝细胞以及乳腺和胃肠道的上皮细胞都有一定的反应性，后者可能是这些组织中过多的粘蛋白产生的假象。虽然基准PSMA抗体J和作者们的新型PSMA粘合剂10B3在体外与PSMA表现出相似的结合亲和力（图EV1E和F），但当科研人员比较分析它们在各种不同的实体瘤样品中的结合时。图1B-D和EV2所示的结果显示是：1.在前列腺癌中，肿瘤细胞与J和10B3的染色是相当的，而在该疾病实体中观察到10B3与J相比与新血管的结合明显更明显(图1B和D，以及EV2A)。2.在除肺癌以外的多种癌症实体的SCC样本中(非肺癌SCC，n=34，28个头颈癌，3个宫颈/子宫癌，2个膀胱癌，1个阴茎癌)，观察到两种抗体与肿瘤细胞的结合率非常低。10B3表现出略微但显著更明显的染色。观察到J和10B3与这些非肺SCC样本的新生血管有实质性的结合，10B3再次显示出略微但明显更高的染色（图1D）。这与之前发表的关于PSMA在各种癌症实体的肿瘤血管上大量表达的结果一致）。3.最重要的差异在于10B3的结合和J可以记录在肺部SCC中。在这里，他们观察到10B3与J相比，与肿瘤细胞的结合明显且显著升高，而与新血管的结合则与两种抗体相当相似（图1C和D，以及EV2B）。他们通过使用10B3和针对膜相关上皮细胞粘附（EpCAM）分子的抗体的双色免疫荧光进一步证实10B3识别SCC癌细胞上的膜PSMA（图EV3B）。在体外抗肿瘤活性上，用于分析T细胞活化、肿瘤细胞杀伤和细胞因子释放，22Rv1low和LNCaP细胞表达约3,和40个。每个细胞的PSMA分子，分别被用作靶标（见材料和方法部分解释22Rv1细胞培养过程中的PSMA表达）。在LNCaP细胞存在的情况下，最大的T细胞活化和肿瘤细胞耗竭由两个bs诱导，浓度约为10pM，PBMC:目标比例为4:1。重要的是，IgGsc分子在没有靶细胞的情况下没有诱导任何不希望的T细胞活化，而Fabsc试剂在浓度0.1微克/毫升时始终诱导T细胞的非特异性增殖，并伴随着细胞因子的适度释放。在体内药代动力学和抗肿瘤活性上，使用螯合剂p-NCS-Bn-NODAGA用64Cu标记这两种抗体，并证明共轭过程既不影响与PSMA或CD3表达细胞的结合，也不影响在PSMA表达的靶细胞存在下的T细胞活化。随后，使用两种不同的小鼠模型研究构建体的体内抗肿瘤活性。21天后，用流式细胞仪测定动物肺部的转移细胞数量。在这个模型中，IgG分子的活性明显优于较小分子的活性，尽管Fabsc试剂被反复注射以弥补其较低的血清半衰期.接下来，我们采用了第二种肿瘤模型，其中大型肿瘤在治疗前建立。将LNCaP细胞注入动物的右翼，当肿瘤直径达到5mm时开始治疗。用IgGsc分子治疗的小鼠，在相当低的剂量2微克与人PBMC一起每周间隔应用三次时，经历了完整而持久的肿瘤消退。首次在人体内应用在完成GMP生产后，由Helmholtz协会提供的公共资金启用，IgGsc蛋白，被指定为CC-1。应用于3例对标准治疗耐药的转移性前列腺癌患者。在治疗前，所有患者都接受了PSMA特异性示踪剂的MRT和PET扫描，该示踪剂在多个肿瘤部位的PSMA表达得到了印证。然后在个体化实验治疗方法的过程中应用CC-1，采用每日剂量升级的方式，从20-40μg直至2.6mg。为了防止临床相关的细胞因子释放综合征(CRS)，一旦首次出现发热≥38.5°时，立即应用抗IL-6R抗体Tocilizumab。与广泛用于预防CRS的类固醇的静脉注射应用相比，托希利珠单抗在体外和体内都不会干扰T细胞的激活。在这些条件下，CC-1的血清浓度高达-ng/ml，比基准bsAbBlinatumomab达到的浓度高两个数量级以上。患者1没有出现相关副作用，患者3出现荨麻疹，局部应用类固醇后消退。患者二出现了肺水肿，最终需要大剂量静脉注射类固醇治疗才能完全康复。值得注意的是，回顾性分析发现，该患者曾因造血性恶性肿瘤进行过异基因干细胞移植，其原有的人源性抗体可能增强了CC-1的消除作用，但重要的是也增强了保护性抗体tocilizumab。在所有患者中，观察到深刻的T细胞活化和PSA水平的快速和明显下降，在停止CC-1治疗-ment后20-30天又上升。概括起来就是该文章探讨了针对肿瘤相关的双特异性抗体（bsAbs）的问题。靶抗原和T细胞受体(TCR)/CD3复合物可以重新引导T细胞对抗癌细胞，有时会导致完全重生，如在B细胞源性白血病患者中观察到的。然而，bsAb对实体瘤的激活作用并不那么令人印象深刻，这可能是由于此类肿瘤对T细胞的可及性有限。为此，理想的靶抗原不仅要在肿瘤细胞上表达，还要在肿瘤血管上表达，以允许免疫细胞充分涌入受损的血管（双重靶向）。实验结果就是：前列腺特异性膜抗原(PSMA)在前列腺癌细胞以及许多实体瘤类型的血管细胞上表达。我们已经产生了一种PSMA抗体，它能识别一个构象表位，似乎特别适合于双重靶向。我们已经用这种抗体构建了基于Fab和IgG支架（Fabsc和IgGsc）的两种不同格式的bs抗体。这两种分子在体外的抗肿瘤活性是相当的。在体内，IgGsc由于其较长的半衰期和较好的肿瘤定位而效率较高。影响力：他们已经开发了一种IgG衍生的双特异性抗体，用于改善对PSMA表达的肿瘤的双重靶向。已经完成了符合GMP标准的生产，并且正在进行在前牙癌患者中的首次人源性研究（NCT）。生物治疗在近30年里取得了飞速发展，是目前医药领域中最令人瞩目、最鼓舞人心的焦点，已经成为临床治疗中不可缺少的重要部分。在细胞治疗领域，自体免疫细胞治疗技术(CAR-T,TCR-T,CTL,TIL和DC)、干细胞技术及基因治疗技术取得重大突破；在非细胞治疗领域，以治疗性抗体、疫苗和重组蛋白药物为代表的生物治疗药物已广泛应用于各个疾病治疗领域。生物治疗产业大会震撼来袭，闪耀申城！
会议内容
六大板块聚焦行业热点
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规模：人
主办单位：四叶草会展
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会议费用：为生物医药技术研发人员提供参会福利，5月20日之前报名FREE!（仅收取元定金，含茶歇、会议资料等，定金概不退还），先到先得，报完即止，5月20日以后报名将收取会议费！
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